人IL-6基因的克隆及其在原核生物中表達(dá)及條件的優(yōu)化

構(gòu)建人白細(xì)胞介素6(IL-6)的原核表達(dá)載體并優(yōu)化其表達(dá)條件,為IL-6的高效表達(dá)提供試驗(yàn)依據(jù).以人T細(xì)胞cDNA為模板通過PCR方法擴(kuò)增IL-6基因,將其克隆到原核表達(dá)載體pET28a (+)中,酶切及測(cè)序鑒定重組體.將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),產(chǎn)物用Western blotting及人IL-6檢測(cè)試劑盒分析鑒定.在保持菌種不改變的前提下,分別改變IPTG的濃度、培養(yǎng)時(shí)間、卡那霉素濃度、培養(yǎng)溫度等來優(yōu)化IL-6表達(dá)條件.結(jié)果顯示,原核表達(dá)載體pET28 a(+)-IL-6成功構(gòu)建,可在大腸桿菌BL21 (DE3)中誘導(dǎo)表達(dá),得到相對(duì)分子質(zhì)量約22 kD的IL-6蛋白,經(jīng)Western blotting鑒定正確,經(jīng)人IL-6試劑盒檢測(cè)顯示具有較高的免疫活性.在 IPTG濃度400 μmol/mL,卡那霉素濃度50 μg/mL,40℃培養(yǎng)6 h的條件下,目的蛋白表達(dá)量最高,可占總蛋白表達(dá)量的40%.成功構(gòu)建人IL-6原核表達(dá)載體且獲高效表達(dá),為研究IL-6生物學(xué)活性及產(chǎn)品開發(fā)提供了試驗(yàn)基礎(chǔ).

作 者： 史繼靜 劉朝奇 楊凡 楊祖?zhèn)?  作者單位： 三峽大學(xué)分子生物學(xué)研究所,宜昌,443002  刊 名： 生物技術(shù)通報(bào)  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY BULLETIN  年，卷(期)： 2010 ""(5)  分類號(hào)：   關(guān)鍵詞： IL-6   原核表達(dá)   條件優(yōu)化  

【人IL-6基因的克隆及其在原核生物中表達(dá)及條件的優(yōu)化】相關(guān)文章：

臭鼻桿菌腈水解酶基因(bxn)的克隆及其在原核生物中的表達(dá)04-27

人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆與原核表達(dá)04-27

IL15/PAP融合蛋白基因克隆及其原核與植物表達(dá)載體的構(gòu)建04-26

銀鯽Ran基因的cDNA克隆、表達(dá)特征及其在精核解凝中的作用04-26

雞CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建04-26

大腸癌相關(guān)基因PGDH原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)04-26

人IP-10蛋白原核表達(dá)及其活性鑒定04-26

嗜肺軍團(tuán)菌lvgA基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)04-26

甲醇利用菌SDM11中g(shù)lyA基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)04-26

葛仙米中SOD基因的克隆及在大腸桿菌中的表達(dá)04-27